USB接続の外付けHDDということでいいでしょうか?
USB接続の外付けHDDで確認してみましたが、取り外してすぐに使われていたドライブレターは使える状態になりました。
ドライブレターが取り戻せないということであれば、下のサイトにある「安全な取り外し」を行うとか、取り外した状態でPCを再起動してみたらどうでしょうか。
また、カードリーダーや他のものにドライブレターが使われていないかも確認してみてください。
また、使ったことがないのでよく分かりませんが、HDDケースのようなものを使用している場合は、ケースの接続を外す必要があるのかもしれません。